細胞:H1944細胞
中文名稱:人非小細胞肺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:1640培養基 血清:10%FBS(GIBCO胎牛血清)
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細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或者凍存。
支氣管炎病毒(AIBV)核酸檢測:
實驗目的:實驗用于檢測動物體液、咽或泄殖腔試子或肺臟、腎臟、淋巴結等組織標本以及細胞培養液中禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)RNA;
實驗原理:選取一對禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)特異性引物和一條特異性熒光探針,應用Trizol提取RNA,經逆轉錄酶作用將RNA轉錄成cDNA,后者在Taq酶作用下,配以FQ-Buffer(內含Mg2+、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體(dNTPs)等成分,用一步PCR熒光探針法對禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV) RNA進行擴增,從而達到快速檢測之目的。
適用實驗標本:動物體液、咽或泄殖腔試子或肺臟、淋巴結等組織標本;病毒細胞培養液。
實驗標本采集:
組織:取發病動物肺、肝、脾、肺、腎、淋巴結及胰腺等組織約1g,置入1.5ml潔凈EP管。
體液及培養液體:取上述標本約1ml,置入1.5ml潔凈EP管。
咽及泄殖腔等試子:用棉試子取咽或泄殖腔分泌物,將試子放入盛有1.0ml PBS(或生理鹽水)的離心管中。