細(xì)胞:R1610細(xì)胞
中文名稱:倉鼠肺細(xì)胞
生長(zhǎng)特性:貼壁
培養(yǎng)基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO
R1610細(xì)胞傳代:
1):細(xì)胞密度約80%時(shí),吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意根據(jù)實(shí)際情況,把握消化時(shí)間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí);
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細(xì)胞層某處,即可肉眼可見細(xì)胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續(xù)消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,把細(xì)胞層吹落,吹散。
3):取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿中,添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4):注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存。
收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換配套培養(yǎng)基,或自己配置的新鮮培養(yǎng)基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間最長(zhǎng)不宜超過72小時(shí))。
(網(wǎng)絡(luò)信息主針對(duì)網(wǎng)絡(luò)推廣作用,僅供參考,細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)咨詢細(xì)胞庫管理員,以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn),操作前,如果有不明白之處,先咨詢細(xì)胞庫管理員,避免不必要的損失;)
細(xì)胞重編程最初是在體外研究中獲得突破的,然而越來越多的研究表明,重編程也可以在體內(nèi)完成,體內(nèi)重編程的效率甚至比體外還要好。
(人MDA-MB-453細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 人乳癌細(xì)胞)(人REH細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 人急性非B非T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞)
在轉(zhuǎn)基因小鼠中通過誘導(dǎo)OSKM,成功重編程了多種組織的細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)活體內(nèi)的iPSC能達(dá)到超越體外iPSC的全能狀態(tài)。進(jìn)一步的分析顯示,體內(nèi)iPSC在轉(zhuǎn)錄組水平上更類似于桑椹胚(morulas)而不是胚胎干細(xì)胞ESC。
(小鼠SV40 MES 13細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 小鼠腎小球系膜細(xì)胞)
體外和體內(nèi)的iPS過程存在差異,因此在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中測(cè)試細(xì)胞重編程是很重要的。在動(dòng)物模型中進(jìn)行細(xì)胞重編程可以為人們揭示更多的信息,因?yàn)轶w內(nèi)環(huán)境可能對(duì)細(xì)胞命運(yùn)產(chǎn)生間接的影響。
(大鼠RIN-m5F細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 大鼠胰島素瘤上皮細(xì)胞)
細(xì)胞環(huán)境有著超越基因組的影響,正因如此,大規(guī)模“組學(xué)"數(shù)據(jù)將是未來細(xì)胞重編程的一個(gè)重要方面。雖然我們認(rèn)為iPSC和ESC在功能上是相同的,但轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組和表觀基因組水平的深入研究將有助于闡明環(huán)境對(duì)重編程的影響。另外,在單個(gè)細(xì)胞中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)“組學(xué)",將能鑒定那些造成iPSC多能性差異的基礎(chǔ)元件。
(人BT474細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 人乳癌細(xì)胞)(人H1975細(xì)胞 來源:通派細(xì)胞庫 人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞)
目前細(xì)胞重編程領(lǐng)域普遍缺乏定量數(shù)據(jù)。實(shí)際上文獻(xiàn)中的重編程效率差異,可能更多的是由體細(xì)胞內(nèi)部異質(zhì)性造成的,而不是方法學(xué)上的問題。定量理解這樣的異質(zhì)性,可以幫助我們從細(xì)胞群體中區(qū)分出想要的細(xì)胞。