細胞:RAOEC細胞
中文名稱:大鼠血管內皮細胞
生長特性:貼壁
培養基:DMEM-L +10% FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
RAOEC細胞傳代:
1):細胞密度約80%時,吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意根據實際情況,把握消化時間)。
2):鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時;
(可用吸管吸起些許yi酶輕輕吹打細胞層某處,即可肉眼可見細胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續消化)
直接吸掉yi酶,加3~4ml 培養基,輕輕吹打細胞層,把細胞層吹落,吹散。
3):取部分細胞懸液轉移到新的培養皿中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4):注意培養基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存。
收到細胞后請盡快更換配套培養基,或自己配置的新鮮培養基(含15%血清),如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時)。
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通過細胞重編程的兩個狀態,描述了異質性產生的基礎。首先,OSKM轉基因激活一系列隨機事件,當這些事件達到“適當"條件時,細胞轉變為第二個狀態。
(人H1975細胞 來源:通派細胞庫 人非小細胞肺腺癌細胞)(人BT474細胞 來源:通派細胞庫 人乳癌細胞)
這個狀態會出現決定性的基因表達,此時轉基因被沉默,細胞被重塑為多能性狀態。在Buganim這個模型中,轉基因激活與沉默之間的平衡,是細胞重編程效率低的重要原因。
(人REH細胞 來源:通派細胞庫 人急性非B非T淋巴細胞性白血病細胞)(人WiDr細胞 來源:通派細胞庫 人大腸癌細胞)
可以換一種途徑進行重編程,激活或沉默非基因組的因子,將有望顯著提高重編程效率。“組學"數據無疑能加深我們對這些因子的認識,幫助我們理解細胞重編程的必要條件和非必要條件。
(小鼠OP9細胞 來源:通派細胞庫 小鼠顱蓋成纖維細胞)(人HT29細胞 來源:通派細胞庫 人結直腸腺癌細胞)
在這些信息的基礎上,我們可以同步細胞動態,在引入轉基因時讓大多數細胞處于佳狀態。已經有前期工作表明,重編程動態受到一些限速步驟的調控。
(小鼠mMSC細胞 來源:通派細胞庫 小鼠骨髓間充質干細胞)(人MV522細胞 來源:通派細胞庫 人肺癌細胞)
比如,去除組蛋白乙酰化的一個抑制子,可以使體外重編程的效率達到幾乎100%。此外,引入OSKM也會刺激甲基化等細胞過程,以維持內穩態。對于研究這些過程的動態而言,定量技術將特別有優勢。FACS和拉曼光譜才剛開始用于細胞重編程的定量研究,就已經表現出了很大的潛力。