細胞:A875細胞
中文名稱:人黑色素瘤細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:DMEM-H +10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
A875細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)

核孔復合體模型及其結構蛋白;
根據高倍電子顯微鏡對青蛙卵細胞、昆蟲細胞、(通派細胞庫供應:WRL68細胞株)脊椎動物細胞和酵母細胞等的研究人們提出了核孔復合體的圓柱狀模型,該模型認為細胞核膜由內、外兩層核膜組成,兩核膜之間為核間腔(nuclear lumen);
內外兩側核膜以外分別為核液面和胞質面;(通派細胞庫供應:L929細胞株)每個NPC由對稱的8分子幅蛋白(spoke)將內、外兩層核膜粘在一起且8分子幅蛋白相互圍成一疏水孔道;孔中心有一中央插銷蛋白(central plug,transporter),中央插銷蛋白控制著生物大分子出入NPC的速率或啟閉;
幅蛋白與內層核膜融合為一胞質環(cytoplasmic ring),(通派細胞庫供應:95d-nc細胞株)胞質環引出八根長30~50nm游離于胞質的胞質纖絲(cytoplasmic filament);同樣,幅蛋白與外層核膜融合成一核質環(nuclear ring),核質環上引出八根長100nm提籃纖絲(basket filament)
由一根終末環(terminal ring)將提籃纖絲的另一端連在一起形成提籃樣網筐(nuclear basket)結構。
核質環直接與核內核纖層蛋白(nuclear lamina)相連,(通派細胞庫供應:Nrk-52e細胞株)終末環與核內纖絲樣核網格(nuclear lattice)骨架蛋白相連,形成核內復雜的高級網格骨架基礎。
當生物小分子通過NPC進行自由擴散時NPC孔徑約9nm,(通派細胞庫供應:5-8f-m細胞株)生物大分子進行主動轉運時孔徑可達25nm,可見NPC結構并不是剛性的。
NPC數目、位置和孔徑均處于周期性變化,NPC隨機分布于細胞核表面上,不同時期細胞核表面上NPC數目不一樣,NPC數量最多時可達107個/核。