細胞:AML12細胞
中文名稱:小鼠正常肝細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:D/F12+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
AML12細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% yi酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉yi酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
(網絡信息主針對網絡推廣作用,僅供參考,細胞培養請咨詢細胞庫管理員,以細胞庫管理員提供給您的信息為準,操作前,如果有不明白之處,先咨詢細胞庫管理員,避免不必要的損失;)

JCB核孔轉運時間和效率取決于輸入素的濃度:
組成NPC的特征蛋白為糖蛋白gp210和核孔素(nucleoporin, Nup);糖蛋白gp210為一種跨核膜的N-連接糖蛋白,(通派細胞庫供應:Ecv304細胞株)能與伴刀豆球蛋白A強烈結合,作用是將NPC固定于核膜上;
核孔素為一組由8~12種O-連接糖蛋白構成的蛋白家族,(通派細胞庫供應:T-24細胞株)與麥胚凝集素(WAG)親和,廣泛分布于NPC孔周圍,在細胞質與細胞核內也可檢出,作用與生物分子的核質轉運有關。
在分子結構上gp210有錨定NPC核膜的結合域及與親核素蛋白結合的結合域,(通派細胞庫供應:Pc-3m細胞株)而核孔素蛋白分子上至少有三類重復序列,其中N末段有FG二肽結構域[3,4],這些序列都是生物大分子進行核質轉運的分子基礎。
生物大分子的細胞核質轉運過程;在入核轉運過程中存在于胞質中的具有核定位信號肽(nuclear location signal,NLS)的轉運蛋白(簡稱NLS蛋白);(通派細胞庫供應:CEF細胞株)首先與NPC附近Importin α結合,Importin α再與Importin β相結合形成NLS-Importin α/β復合體。
然后NPC內核孔素蛋白通過其自身重復序列與Importin β結合,(通派細胞庫供應:HEB細胞株)并將NLS-Importin α/β復合體定位(docking)在NPC胞質纖絲上,隨后胞質纖絲發生彎曲將其復合體依次遞呈到細胞NPC中央插銷蛋白上,并與核質纖絲發生結合、解離平衡,復合體被送入細胞核內。