細(xì)胞：AN3CA細(xì)胞

中文名稱：人子宮內(nèi)膜腺癌(轉(zhuǎn)移)細(xì)胞

生長特性：貼壁細(xì)胞

培養(yǎng)基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40% FBS、10% DMSO

AN3CA細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（ 請嚴(yán)格遵照無菌操作）

1． 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加 2-3 ml 0.25% yi酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時間，通?？刂圃?1-2min）

2． 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ魕i酶，加 6~8ml 培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散。

3． 取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4． 注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項操作或凍存。

（網(wǎng)絡(luò)信息主針對網(wǎng)絡(luò)推廣作用，僅供參考，細(xì)胞培養(yǎng)請咨詢細(xì)胞庫管理員，以細(xì)胞庫管理員提供給您的信息為準(zhǔn)，操作前，如果有不明白之處，先咨詢細(xì)胞庫管理員，避免不必要的損失；）

復(fù)合體在通過NPC中央孔時所耗能量由RanGTPase水解GTP提供，（通派細(xì)胞庫供應(yīng)：DT40細(xì)胞株）同時激活I(lǐng)mportin β，后者可使Importin α和NLS分別從NLS-Importin α/β復(fù)合體上釋放下來，NLS分子在核內(nèi)馬達(dá)分子(motor)推動下沿核內(nèi)骨架發(fā)生固相傳輸（solid transfer）。

核內(nèi)Importin β與RanGTP結(jié)合成二聚體再轉(zhuǎn)運(yùn)回胞質(zhì)，（通派細(xì)胞庫供應(yīng)：A549細(xì)胞株 ）胞質(zhì)中Importin β/RanGTP二聚體在RanGTPase作用下解離為Importin β和RanGDP，Importin β繼續(xù)參與下一輪NLS蛋白的入核轉(zhuǎn)運(yùn)；

核內(nèi)Importin α的出核轉(zhuǎn)運(yùn)過程較為復(fù)雜, （通派細(xì)胞庫供應(yīng)：Raw264.7細(xì)胞株）首先核內(nèi)Importin α在CAS蛋白和RanGTP作用下形成三聯(lián)體轉(zhuǎn)運(yùn)回胞質(zhì)，然后三聯(lián)體在胞質(zhì)RanGTPase作用下解離為Importin α、CAS和RanGDP。

最后胞質(zhì)Importin α繼續(xù)參與下一輪NLS蛋白的入核轉(zhuǎn)運(yùn)過程，CAS則直接返回細(xì)胞核內(nèi)。