人腦瘤細胞SF126 細胞 ELISA的技術要點
ELISA的技術要點包括三個方面：試劑的制備、反應條件的選擇和操作的標準化。
一、試劑的制備
ELISA的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標記的抗原或抗體和與標記酶直接關聯的酶反應底物。以下敘述這些試劑的原料和制備方法。
（一）固相載體
可作ELISA中載體的物質很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能，抗體或蛋白質抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。在ELISA測定過程中，它作為載體和容器，不參與化學反應。加之它的價格低廉，所以被普遍采用。
人胎兒胸腺細胞株HFT-8810
人前列腺上皮細胞RWPE-1
人前列腺正常細胞RWPE-2
人男性正常龜頭細胞Hs68
人整合 SV40基因的乳腺上皮細胞HBL-100
人前列腺癌細胞DU 145
人乳腺癌細胞MDA-MB-231
人前列腺癌細胞LNCaP
人乳腺癌細胞MCF 7B
人乳腺癌細胞MDA-MB-157
人乳腺導管癌細胞ZR-75-1
人乳腺導管瘤細胞UACC812
人前列腺癌高轉移細胞株PC-3M-IE8
人前列腺癌低轉移細胞株PC-3M-2B4
人乳腺導管癌細胞HCC38
人乳腺導管癌細胞ZR-75-30
人乳腺癌瘤株MCF7
人乳腺癌細胞BT-20
人乳腺導管癌細胞BT-549
人乳腺導管癌細胞MDA-MB-175Ⅶ
人乳腺癌細胞MDA-MB-415
人乳腺導管癌細胞MDA-MB-435
人乳腺癌細胞MDA-MB-436
人乳腺癌細胞Bcap-37
人前列腺癌細胞LNCaP clone FGC
人乳腺癌細胞MDA-MB-453
人乳腺癌細胞MDA-MB-435S
人乳腺癌細胞SK-BR-3
人髓狀甲狀腺腫瘤細胞TT
人乳腺導管癌細胞T47D
人乳腺癌細胞BT-549
人前列腺癌細胞22Rv1
人乳腺癌細胞MDA-MB-468
人甲狀腺鱗癌細胞SW579
人乳腺癌細胞Hs 578T
人乳腺癌細胞MDA-MB-468-06
人乳腺導管瘤細胞BT-474
人乳腺癌細胞HCC1937
人前列腺癌細胞PC-3
人乳腺癌細胞ZR-75-30
人乳腺癌細胞MCF7
人乳腺癌細胞BC－009
人乳腺癌細胞BC－019
人乳腺癌細胞BC－020
人乳腺癌細胞BC－021
人乳腺癌細胞BC－022
人腦瘤細胞SF126 細胞 ELISA的技術要點ELISA載體的形狀主要有三種：小試管、小珠和微量反應板。小試管的特點是還能兼作反應的容器，zui后放入分光光度計中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球，表面經磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器，在洗滌過程中使圓珠滾動淋洗，效果更好。zui常用的載體為微量反應板，于ELISA測定的產品也稱為ELISA板，通用的標準板形是8×12的96孔式。為便于作少量標本的檢測，有制成8聯或12聯孔條的，放入座架后，大小與標準ELISA板相同。ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測，并可在特定的比色計上迅速讀出結果。現在已有多種自動化儀器用于微量反應板型的ELISA檢測，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對操作的標準化極為有利。
良好的ELISA板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別，各種產品的質量差異很大。因此每一批號的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔后，每孔內加入適當稀釋的酶標抗人IgG抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應后分別測每孔溶液的吸光度。控制反應條件，使各讀數在0.8左右。計算所有讀數的平均值。所有單個讀數與平均讀數之差應小于10％。
人腦瘤細胞SF126 細胞 ELISA的技術要點與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯板的特點為質軟板薄，可切割，價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時也略高。
為比較不同固相在某一ELISA測定中的優劣，可用以下方法加以檢驗：用其它免疫學測定方法選出一個典型的陽性標本和一個典型的陰性標本。將它們分別進行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預定的ELISA操作步驟進行測定，然后比較測定結果。在哪一種載體上陽性結果與陰性結果判別zui大，這種載體就是這一ELISA測定的zui合適的固相載體。
除塑料制品外，固相酶免疫測定的載體還有兩種材料：一是微孔濾膜，如硝酸纖維素膜、尼龍膜等，這類測定形式將在本章第五節“膜載體的酶免疫測定”中介紹。另一種載體是以含鐵的磁性微粒制作的，反應時固相微粒懸浮在溶液中，具有液相反應的速率，反應結束后用磁鐵吸引作為分離的手段，洗滌也十分方便，但需配備特殊的儀器。
（二）抗原和抗體
在ELISA實施過程中，抗原和抗體的質量是實驗是否成功的關鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價高、親和力強。
ELISA所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物組織或體液、微生物培養物等，一般含有多種抗原成分，需經純化，提取出特定的抗原成分后才可應用，因此也稱提純抗原（purifiedantigen）。重組抗原（recombinantantigen）和多肽抗原（peptideantigen）均為人工合成品，使用安全，而且純度高，干擾物質少。因此雖然制備合成抗原有較高的技術難度且要求較為昂貴的儀器設備和試劑，其應用仍十分普遍，特別是對那些天然抗原不易得到的試驗，更顯出其獨到之處。
用于ELISA的抗體有多克隆的和單克隆的。抗血清成分復雜，應從中提取IgG才可用于包被固相或酶標記。含單克隆抗體的小鼠腹水中的特異性抗體含量較高，有時可適當稀釋后直接進行包被。制備酶結合物用的抗體的質量往往要求有較高的純度。經硫酸銨鹽析純化的IgG可進一步用各種分子篩層析提純。也可用親和層析法提純特異性IgG，如用酶消化IgG后提取的Fab片段，則效果更好。
