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ELISA試劑盒試驗原理:
被石蠟包埋的組織切片在二甲苯中脫去石蠟并逐級水化后,進行內源性的過氧化物酶淬滅。內源性過氧化物酶可以被甲醇或Zymed's Peroxo-Block (目錄號:00-2015)中的3%的過氧化氫所抑制。
說明:非免疫血清用來去除非特異性背景。孵育一抗后,加入二抗,再經過一步沖洗,加入鏈霉親和素過氧化物酶藕聯物。
ELISA試劑盒操作步驟:
1.使用前將ELISA試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調零,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
ELISA試劑盒樣本處理:
1.剛取得的新鮮組織樣本用PBS洗凈。
2.準確稱取50mg組織,加入1ml勻漿緩沖液A,用玻璃勻漿器充分勻漿。
3.在1000g,4℃離心10分鐘,棄沉淀,取上清。
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