問1.同為蛋白定量產品,非標記定量和標記定量的適用場景有何差別?
標記定量分析技術可同時比較2-10組樣品之間的蛋白組表達差異,是近年來定量蛋白質組學常用的高通量篩選技術。而非標記定量技術不需要標記,定量樣本數不受限制,其中蛋白DIA定量分析技術被《Nature Methods》雜志評為2015年值得關注的技術之一,具有定量準確性高、技術重現高的優點。
兩相比較之下,非標記定量DIA更適用于以下情況:
1)實驗組數高于10組;
2)樣本來源于不同物種、不同組織或不同部位,需進行平行蛋白組定量檢測;
3)需要區分樣本中的“有無蛋白”;
4)追求更的定性和定量效果,避免標記和液相分組引入的實驗誤差;
5)需要對采集的數據進行多次重挖掘分析。
兩相比較之下,標記定量iTRAQ/IBT更適用于以下情況:
1)實驗組數低于10組(即同時比較的樣本數≤10);
2)樣本背景較為相似(相同物種和相同的樣本類型)。
這么看來,如果您的樣本量>10,想不受限制地獲得更為豐富和的數據,DIA將是更合適的選擇
問2.蛋白定量研究結果的等待時間太長?
目前市面上常見的蛋白組定量產品的交付周期超過半月,為了給科學研究帶來更ji致的體驗,古朵生物推出了極速交付的蛋白組定量產品,從樣本檢測合格到數據產出,僅需13天!同時保證品質無損、價格更優。
問3. 如何保障蛋白定量的準確性?
除了追求鑒定數量和價格,定量準確才是硬道理。
問3.有哪些容易忽略的關鍵點會影響蛋白定量的準確性?
對于標記定量蛋白質組技術(iTRAQ/IBT/TMT),其優勢在于將所需比較的樣品標記后混在一起無偏好地同時進行后續實驗和質譜檢測,消除了系統實驗誤差,使得定量可比性更直接。但是,標記定量技術帶來的另一個問題是共洗脫等因素導致的定量比值壓縮效應(Nat Methods. 2011 Oct 2;8(11):937-40),也就是說,實際定量檢測到的差異倍數會比真實差異倍數小。所以,對于標記定量蛋白質組分析得到的感興趣關鍵蛋白,通常建議后續做進一步的PRM或MRM驗證其定量準確性。
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