ELISA試劑盒加液過程注意事項及如何選購試劑盒

　　在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。

　　加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。

　　ELISA試劑盒實驗

　　加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以免發生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。

　　加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。

　　作為ELISA測定的標本十分廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液)，有些則需經預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清自然凝固后即可取得。除特殊情況外，在醫學檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。

　　ELISA試劑盒血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA試劑盒中可使本底加深。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。

　　如何選購試劑盒：

　　必看要點：

　　1、明確檢測何種蛋白;

　　2、明確編碼該蛋白的基因與其它哪些物種同源性;

　　3、尋找檢測這些物種蛋白的試劑盒;

　　4、咨詢供應商ELISA是試劑盒使用的抗體類型：多抗還是單抗，單抗是針對什么抗原決定簇的;

　　5、做出自己的判斷該買哪個試劑盒。

　　重點注意：

　　1、按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

　　2、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

　　3、不同批號的試劑不要混用，保質前使用。

　　4、避免長時間打開蓋子，實驗完成后應立即讀取OD值。

　　5、加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

　　6、按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

　　ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。