過氧化物酶(POD)檢測試劑盒說明書（可見分光光度法）

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

貨號：YX-C-A502 

規格：50T/48S

產品內容：

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 0.33mL×2 瓶，4℃保存；用時每瓶加入 5mL 試劑一；用不完的試劑 4℃保存一周；
試劑三：液體 10 mL×1 瓶，4℃保存。
產品說明：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD 催化 H2O2 氧化特定底物， 在 470nm 有特征光吸收。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
過氧化物酶(POD)檢測試劑盒操作步驟：
一、粗酶液提取：
1、 細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入
1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、 血清（漿）樣品：直接檢測。二、測定步驟：
1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 470nm，蒸餾水調零。
2、測定前將試劑一、二和三 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）放置 10min。
3、樣本測定表

過氧化物酶(POD)檢測試劑盒在 1mL 玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計時，記錄 470nm 下 30s 時的吸光值A1 和 1min30s 后的吸光值 A2。計算ΔA＝A2-A1。

注意：

a. 若一次性測定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在 37℃（哺乳動物） 或 25℃（其它物種）放置 10min 以上，測定時加入 15µL 樣本和 1055µL 混合液測定。
b. 如果ΔA 小于 0.005，可將反應時間延長到 5min。如果ΔA 大于 0.5，可將樣本用提取液稀釋后測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。
三、POD 活性計算：
1、 血清（漿）POD 活性
單位定義：每 mL 血清（漿）在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個酶活力單位。計算公式：POD（U/mL）=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =7133×ΔA
2、 組織、細菌或細胞 POD 活性
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每 mg 組織蛋白在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位定義：每 g 組織在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V 反總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞數量計算
單位定義：每 1 萬個細菌或細胞在每 mL 反應體系中每分鐘 A470 變化 0.01 為一個酶活力單位。
過氧化物酶(POD)檢測試劑盒POD（U/104 cell）＝ΔA×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA
V 反總：反應體系總體積，1.07mL；V 樣：加入樣本體積，0.015mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數，500 萬