脂肪酸合成酶（FAS）活性檢測試劑盒紫外分光光度法說明書，注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

FAS 是脂肪酸合成關鍵酶，催化乙酰輔酶 A 和丙二酰輔酶 A 而生成長鏈脂肪酸。FAS 普遍 表 達于各種組織細胞中，在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達豐富。

測定原理：

     FAS 催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成長鏈脂肪酸和 NADP +；NADPH 在 340nm 有 吸收峰，而 NADP+沒有；通過測定 340nm 光吸收下降速率，計算 FAS 活性。

自備儀器和用品：

     研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL 石英比色皿、可調式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，－20℃保存。用前取出置于 4℃充分解凍后混勻。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 220 μL 試劑四，充分溶解。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 220 μL 試劑四，充分溶解。

試劑四：液體 10 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 440 μL 試劑四，充分溶解。

 脂肪酸合成酶（FAS）活性檢測試劑盒粗酶液提取： 

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿。12000g，4℃離心 40min，取上清置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬 細胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）； 然后 12000g，4℃，離心 40min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接測定。

 FAS 測定操作：

1. 分光光度計預熱 30min，調節波長到 340 nm，蒸餾水調零。

2. 試劑四置于 37℃水浴中預熱 30 min。

3. 空白管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 蒸餾水、20μL 試劑二、20μL 試劑三、820μL 試 劑四和 40μL 試劑五，迅速混勻后于 340nm 處測定吸光值，記錄第 30s 和 90s 時吸光值， 分 別記錄為 A1 和 A2。△A 空=A1-A2。

4. 測定管：在 1mL 石英比色皿中依次加入 100μL 上清液、20μL 試劑二、20μL 試劑三、820μL 試 劑四和 40μL 試劑五，迅速混勻后于 340nm 處測定吸光值，記錄第 30s 和 90s 時吸光值， 分 別記錄為 A3 和 A4。△A 測=A3-A4。

脂肪酸合成酶（FAS）活性檢測試劑盒注意：空白管只需測定一次。

 FAS 活性計算公式：

（1） 按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1 個酶活單位。 FAS(μmol/min/mg prot) =[(△A 測定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×106 ] ÷(Cpr×V 樣)÷T =1.61×(△A 測定管–△A 空白管) ÷Cpr

 （2） 按照樣本質量計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1 個酶活單位。 FAS(μmol/min/g) = [(△A 測定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10⁶] ÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T =1.61×(△A 測定管–△A 空白管) ÷W

（2） 按細胞數量計算

活性單位定義：37℃中每10⁴個細胞每分鐘氧化 1μmol NADPH 為1個酶活單位。

FAS(μmol /min/10⁴ cell) = [(△A 測定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10⁶ ] ÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總)÷T =1.61×(△A 測定管 –△A 空白管) ÷細胞數量

（3） 按液體體積計算

活性單位定義：37℃中每毫升樣本每分鐘氧化 1μmol NADPH 為 1 個酶活單位。 FAS(μmol/min/mL) =[(△A 測定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反總×10⁶ ] ÷V 樣÷T =1.61×(△A 測定管–△A 空白 管)

ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×10³ /mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V 反總：反應體系總 體積， 1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；V 樣：加入 反應體系中上清 液體積，100μL=0.1 mL；T：反應時間，1min。

 脂肪酸合成酶（FAS）活性檢測試劑盒注意事項：

1. 上清液蛋白質濃度需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。

2. 配制好的試劑 4℃保存，三天內使用完畢