脫氫酶(pDHA)檢測試劑盒微量法說明書，注意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

生物體的脫氫酶(Plant dehydrogenase , DHA)的活性在很大程度上反映了生物體的活性狀態(tài)，能直接表示生物細(xì)胞對(duì)其基質(zhì)降解能力的強(qiáng)弱。

測定原理：

受氫體 2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，即TTC）在細(xì)胞呼吸過程中接受氫以后，其還原產(chǎn)物三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone，即TF）呈現(xiàn)紅色，在波長485nm處有最大吸收峰，測定其485nm吸光值，即得植物脫氫酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、研缽、濾紙、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、冰、蒸餾水和乙酸乙酯。

試劑的組成和配制：

試劑一：粉劑×1瓶，使用前加少量水溶解，定容至50mL，避光、4℃保存（盡量現(xiàn)配現(xiàn)用）。

試劑二：液體 100mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：乙酸乙酯，自備。

脫氫酶(pDHA)檢測試劑盒樣品處理：

稱取0.1g的植物組織，用雙蒸水清洗3-4次，用濾紙吸干水分，備用。

測定步驟和操作表：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至485nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

脫氫酶(pDHA)檢測試劑盒脫氫酶活力計(jì)算：

酶活單位定義：在37℃時(shí)，每小時(shí)每克樣品使反應(yīng)體系OD值每增加0.01為一個(gè)酶活單位。計(jì)算公式：脫氫酶活性（U/g.h）=Δ A÷0.01÷W÷T

=300×Δ A÷W

T：反應(yīng)時(shí)間，3h；W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1. 配制好的試劑一避光保存于 4℃，盡量在一周內(nèi)使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。
2. 試劑三易揮發(fā)，有毒，為了您的健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，戴kou罩，戴乳膠手套操作。
3. 反應(yīng)完成后立即冰浴以終止反應(yīng)，并去除干凈殘留的反應(yīng)液。
4. 如果測定出來的吸光值較大，需把樣品適當(dāng)稀釋再進(jìn)行測定。
脫氫酶(pDHA)檢測試劑盒5. 試劑盒 2-8℃保存。