谷氨酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒說明書（紫外分光光度法）

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

貨號(hào)：YX-C-A906

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存，臨用前加入40mL試劑一；

試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存，臨用前加入2.5mL試劑二；標(biāo)準(zhǔn)品：液體0.5mL×1支，4℃保存。10μmol/mL谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品。

產(chǎn)品說明：

Glu廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸之一，而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外，Glu還是味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。谷氨酸脫氫酶（GDH）催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH+，引起340nm處吸光度的上升，通過測(cè)定340nm吸光度的變化，計(jì)算谷氨酸含量。

谷氨酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

操作步驟：

一、谷氨酸提取

細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品：收集細(xì)胞或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），10000rpm，常溫離心10min，取上清待測(cè)。

稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，10000rpm，常溫離心10min，取上清待測(cè)。二、測(cè)定步驟

1、紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

將標(biāo)準(zhǔn)品分別稀釋為2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078、0.039μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3、在1mL石英比色皿中加入下列試劑：

a. 標(biāo)準(zhǔn)管：在1mL石英比色皿中加入200μL標(biāo)準(zhǔn)溶液、800μL試劑三和50μL試劑四混勻，立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值為A1和5min20s時(shí)的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算?A=A2-A1。

b. 測(cè)定管：在1mL石英比色皿中加入200μL樣本、800μL試劑三和50μL試劑四混勻，立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值為A1和5min20s時(shí)的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算?A=A2-A1。

三、谷氨酸含量計(jì)算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：以谷氨酸含量（µmol/mL）為x軸，標(biāo)準(zhǔn)管?A為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線y=kx+b。將測(cè)定管?A帶入方程得到x值。

谷氨酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒2、氨基酸含量計(jì)算：

（1） 按照蛋白濃度計(jì)算

谷氨酸含量（µmol/mgprot）=x×V樣本÷（Cpr×V樣本）=x÷Cpr。

（2） 按照樣本鮮重計(jì)算

谷氨酸含量（µmol/g鮮重）=x×V樣本÷（W÷V樣總×V樣本）=x÷W。

（3） 按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

谷氨酸含量（μmol/104cell）＝x×V樣本÷（500÷V樣總×V樣本）=0.002x。

V樣總：加入提取液體積，1mL；V樣本：加入的樣本體積，0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；

W：樣本鮮重，g；1000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，1000萬。

谷氨酸(Glu)含量檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)：

為提高檢測(cè)靈敏度，測(cè)定管的吸光值應(yīng)小于1且?A小于0.4，若大于此值則需要將上清液用試劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定。