37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）準確反應 30min 后，95℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，10000g 25℃離心 5min，取上清

3、定磷（在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）

NADP 磷酸酶（NADPase）檢測試劑盒混勻，25℃室溫放置 30min，在 660nm 處，記錄各管吸光值。

注意事項：

1、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格，要沒有一點磷，若試管放過磷酸或磷酸鹽緩沖液，一定要洗得非常干凈，要先用洗潔精加水煮，再用自來水沖， 最后用蒸餾水沖干凈。最好用一次性塑料管或新玻璃管，避免磷污染是檢測成敗的關鍵。

2、標準管、空白管和對照管只要做一次即可。

NADPase 酶活性計算：

1、按組織蛋白濃度計算：

定義：每小時每毫克組織蛋白 NADPase 分解 NADP 產生 1μ mol 無機磷的量為一個 NADPase 活力單位。

NADPase (μ mol/h/mg prot)=(C 標準管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷ (V 樣×Cpr)÷T=5×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷Cpr

2、按樣本鮮重計算：

定義：每小時每 g 組織 NADPase 分解 NADP 產生 1μ mol 無機磷的量為一個 NADPase 活力單位。NADPase (μ mol/h /g 鮮重)=(C 標準管×V 總)×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管）

×V 總÷(W× V 樣÷V 樣總)÷T=5×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W

NADP 磷酸酶（NADPase）檢測試劑盒C 標準管：標準管濃度，0.5μ mol/mL；V 總：酶促反應總體積，0.2mL；V 樣：加入樣本體積， 0.04mL ；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，0.5 小時；Cpr：樣本蛋白質濃度， mg/mL；W：樣本鮮重，g。