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貨號	A01X1210	規(guī)格	1×106
種屬來源	豬	用途	僅供科研實(shí)驗(yàn)
品牌	撫生

豬鼻腔粘膜上皮細(xì)胞永生化

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞名稱	豬鼻腔粘膜上皮細(xì)胞永生化
商品貨號	A01X1210
產(chǎn)品規(guī)格	1×106

細(xì)胞詳述

鼻腔粘膜，剪成鼻粘膜，覆蓋于鼻腔表面，粘膜下方為軟骨、骨或骨骼肌。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項(xiàng)：收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細(xì)胞。

細(xì)胞特性

1) 組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常鼻腔粘膜組織。

2) 細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）或細(xì)胞角蛋白-19（CK-19）免疫熒光染色為陽性。經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

3) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

4) 細(xì)胞生長方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

原代細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1.準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3.處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30~60分鐘。

4.剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。

5.消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨谩Ｏ瘯r(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6.分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7.計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8.培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶蓋需擰松半圈。

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注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養(yǎng)過程中，消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

4. 公司產(chǎn)品僅用于科研建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。