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貨號	FS-02R6361

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱：阪崎腸桿菌快速檢測試劑盒48T 0.2PCR管
貨號：FS-02R6361

規(guī)格：48T 0.2PCR管

分類：PCR-熒光探針法/PCR法

儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

QQ截圖20200511164444.jpg

試劑配制:

1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。

3、樣品稀釋液：1×20ml。

4、檢測稀釋液A：1×10ml。

5、檢測稀釋液B：1×10ml。

實驗過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer 5μl

dNTP mixl 4μl

引物1（10pM） 2μl

引物2（10PM） 2μl

Taq酶（2U/μl） 1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

特點優(yōu)勢：

1. 特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。

2. 重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證，重現(xiàn)性為100%。

3. 靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4. 實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5. 優(yōu)勢1：序列資源豐富，除公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6. 優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。

D-纈氨乙酯鹽鹽 98%乙鈉，三水 CP,98%鴨生長激1(GH1)免疫試劑盒

L-纈氨芐酯對甲磺鹽 98%乙鈉，三水 GR,99.5%鴨免疫球蛋白E(IgE)免疫試劑盒

L-纈氨甲酯鹽鹽 99%乙鈉，三水 ACS,99.0-101%鴨抗抗體(aPT1/aPT2)免疫試劑盒

L-纈氨乙酯鹽鹽 99%乙鈉，無水 AR,99.0% 鴨低密度脂蛋白(VLDL)免疫試劑盒

0.3~0.8mmol/g, 100~200 mesh 1% DVB乙鈉，無水 99.99% metals basis鴨(cAMP)免疫試劑盒

N-芐氧羰基-L-纈氨琥珀酰亞酯 98.5%乙鈉，無水電泳級, ≥99%鴨環(huán)磷鳥(cGMP)免疫試劑盒

L-正纈氨叔丁酯鹽鹽 99%乙鈉，無水 GR,99.0%鴨白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒

L-纈氨酰鹽鹽 98%乙鈉，無水 ACS鴨白介6(IL-6)免疫試劑盒

L-纈氨 97%1，1-二乙烷 99.5%鴨白介4(IL-4)免疫試劑盒

100-200 mesh, 1%DVB，Substitution 0.3-0.8mmol/g全辛 96%鴨白介2(IL-2)免疫試劑盒

D-纈氨 98%全辛分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析鴨白介1(IL-1)免疫試劑盒

阿肽地爾 ≥95% HPLC全辛離子對試劑，用于LC-MS，98%鴨γ干擾(IFN-γ)免疫試劑盒

伍德沃德氏試劑K 98%全辛 90%鴨β干擾(IFN-β/IFNB)免疫試劑盒

魏因勒卜鏈接劑 98%聚四乙烯微粉平均粒徑: 5μm蜥蜴ELISA試劑盒

Wang Resin 1.51mmol/g, 100~200 mesh, 1% DVB聚四乙烯濃縮分散液 60 wt %分散液蜥蜴孕激/孕酮(PROG)免疫試劑盒
阪崎腸桿菌快速檢測試劑盒48T 0.2PCR管β-丙氨乙酯鹽鹽甲基烯四氫糠基酯CD8抗體

肌氨甲酯鹽鹽1,3-雙(2,4,6-基)-4,5-二氫咪唑鎓四鹽CD8抗體

L-谷氨-5-甲酯4-吡咯烷基吡啶表面趨化因子受體2抗體

肌酐4-吡咯烷基吡啶胱抑B/半胱氨蛋白抑制劑B抗體

人干因子受體（SCFR）ELISA試劑盒,SCFR ELISA kit4-吡咯烷基吡啶趨化樣蛋白抗體

人腫瘤特異性移植抗原（TSTA）ELISA試劑盒, TSTA ELISA kit3,5-二吡啶角蛋白20抗體

人膽囊收縮/腸促胰肽（CCK）ELISA試劑盒,CCK ELISA kit3,5-二吡啶鈣激活的中性蛋白2抗體

人抗紅抗體（RBC）ELISA試劑盒, RBC ELISA kit4-氨基-2-甲CD45RO抗體

使用方法:

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。

1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。