詳細介紹
CD45(白細胞共同抗原)抗體
英文名稱:Anti-CD45(LCA/gp180)
產品編號:B-02126
產品規格:0.1ml/0.2ml
抗體的多樣性:
任何一個正常人血清中的抗體都是含有成千上萬的、多種多樣的、具有各種*型抗原性的免疫球蛋白分子混合物。κ鏈和 λ鏈可以和各類、各亞類配合。重鏈、輕鏈本身又有各種異型,每一克隆產生的Ig又具有自身的*型。
抗體的多樣性受 B細胞系統的遺傳基因控制。肽鏈是由兩個不同基因分別編碼可變區或恒定區,恒定區的基因(C基因)是有限的,它雖然可以決定Ig分子的類別和亞類,為造成Ig分子多樣性的原因之一,但是,造成免疫球蛋白分子多樣性的主要原因卻在于可變區的異質性,可變區是由V基因編碼的,而V基因的數目仍不清楚。
對抗體多樣性的遺傳控制曾提出3種學說:①種系學說(又稱胚系學說):抗體形成細胞具有編碼Ig分子的全部基因(即有限數量的C基因和未知數量的V基因,它是通過長期進化形成并通過生殖細胞從親代傳給子代。又稱胚系學說;②體細胞突變學說:在生殖細胞內只繼承了數量有限的V基因,Ig分子多樣性的形成,是由于體細胞在發育過程中發生突變或基因重組,從而產生許多不同的 V基因。體細胞突變可能對Ig分子的多樣性發生重要作用;③V區基因相互作用學說:Ig分子可變區是由V基因片段、J基因片段和D基因片段組成,V、D、J基因相互連接對Ig分子多樣性的產生,是極為重要的。Ig的多樣性不可能簡單地歸因于上述的某一學說,它可能與上述多種機制有關,也可能還與基因片段連接點上的連接多樣性以及VL和VH鏈的不同配對有關。
單克隆抗體的制備過程:
1)免疫脾細胞的制備 制備單克隆抗體的動物多采用純系 Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備,也可采用脾內直接免疫法。
2)骨髓瘤細胞的培養與篩選 在融合前,骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選,防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性(恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養基中存活)。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養液在細胞培養瓶中培養,融合前24h換液一次,使骨髓瘤細胞處于對數生長期。
3)細胞融合的關鍵: 1技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如,供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。
2融合試驗zui大的失敗原因是污染,融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境,以及適宜的無菌操作技術。
4)陽性克隆的篩選 應盡早進行。通常在融合后10天作*次檢測,過早容易出現假陽性。檢測方法應靈敏、準確、而且簡便快速。具體應用的方法應根據抗原的性質,以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法zui簡便,RIA法zui準確。陽性克隆的篩選應進行多次,均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。
5)克隆化 克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體。克隆化應盡早進行并反復篩選。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩定的,有丟失染色體的傾向。反復克隆化后可獲得穩定的雜交瘤細胞株。
動物免疫
細胞融合
克隆篩選
交雜瘤細胞的克隆化
腹水制備與單抗純化
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