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IP是利用抗原蛋白質和抗體的特異性結合以及細菌蛋白質的“proreinA”特異性地結合到免疫球蛋白的FC片段的現象活用開發出來的方法。目前多用精制的proreinA預先結合固化在argarose的beads上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應后,beads上的proreinA就能吸附抗原達到精制的目的。首先,實驗zui需要注意點就是抗體的性質。抗體不同和抗原結合能力也不同,免染能結合未必能用在IP反應。廣州賽誠生物科技有限公司建議仔細檢查抗體的說明書。特別是多抗的特異性是問題。其次,要注意溶解抗原
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血空斑試驗(plaqueformingcellassay,PFC)是Jerne于1963年設計的用于體外檢查和計數某種抗體形成細胞的一種方法。該方法是將SRBC免疫動物,隨后取其脾制成淋巴細胞懸液與高濃度的SRBC混合后加入瓊脂凝膠中,其中每個釋放溶血性抗體的細胞可致敏其周圍的SRBC,當加入補體時,致敏的SRBC被溶解而形成了局部的溶血空斑,每一個空斑代表一個抗體形成細胞。本實驗采用玻片法。【材料】1.動物,小白鼠,體重18—22g。2.補體,脈鼠新鮮血清(用前須經SRBC吸收:1ml壓積SR
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細胞培養(CellCulture)專題:1、pcDNA3.1+-gD的線性化:pcDNA3.1+使用說明書推薦了以下幾個酶作為線性化酶(BglⅡMfeⅡBst1107ⅠEam1105ⅠPvuⅠScaⅠSspⅠ),通過DNAMAN分析gD序列發現其帶有MfeⅡ酶切位點。2、轉染前一天,在60mm的dish中接種8×105個細胞,加入5ml培養基(含血清,不含抗生素),37℃,5%CO2培養,至轉染時要求細胞40%-80%匯合。3、通過分光光度計測定pcDNA3.1+-gD的濃度,用不含血清、抗生素
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蛋白質的分離純化(一)材料1、選材2、破碎3、混合物的分離(二)粗分級(三)細分級(四)結晶蛋白質的分離方法根據蛋白質的溶解度差異分離—沉淀技術根據蛋白質分子大小的差異分離根據蛋白質的荷電差異分離根據蛋白質與某些物質的吸附差異—吸附分離利用生物分子專一性結合的特性—親和層析蛋白質的分離方法可逆沉淀:等電點沉淀、鹽析法、有機溶劑沉淀不可逆沉淀:熱變性沉淀、重金屬鹽沉淀、有機酸沉淀elisa試劑盒,elisakit,IL-2elisa試劑盒,IL-6elisa試劑盒,IL-10elisa試劑盒,TN
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一、非特異性染色的主要因素組織的非特異性染色的機理很復雜,其產生的原因主要可分為以下幾點:(1)一部分熒光素未與蛋白質結合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。(2)抗體以外的血清蛋白與熒光素結合形成熒光素脲蛋白,可與組織成分結合。(3)除去檢查的抗原以外,組織中還可能存在類屬抗原(如Forssman氏抗原),可與組織中特異性抗原以外之之相應抗體結合。(4)從組織中難于提純抗原性物質,所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體,以致容易混淆。(5)抗體分子上標記的熒光素分子太多,這
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傷口愈合是創傷后人體皮膚和表皮組織再生的自然過程。正常來說,皮膚的表皮(zui外層)和(內部或深層)存在于一個平衡的狀態,以形成一個保護傷口的屏障。而當焦痂破裂,正常的傷口愈合過程便會迅速地開始。其基本過程包括以下階段:①止血期、②炎癥期、③增生期、④成熟及重塑期。原理當細胞長到融合成單層狀態時,在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域,稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕”愈合。基本步驟包括“劃痕”的制造,細胞遷移期間圖像的獲得以及后期數據的處理。應用lWoundhealing
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內參抗體種類很多,比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、LaminB等,那么針對自己的實驗,我們該如何選擇呢?下面簡單介紹下選擇內參抗體應遵循的原則:一.樣本種屬來源:首先要考慮的就是實驗樣本來源于什么物種。1、哺乳動物的組織或者細胞樣本,通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、LaminB、HistoneH3、Na,Katpase等。2、植物來源實驗樣本,則可以選擇plantactin、Rubisco等。3、其他來源樣本研究較少,所以就應該參照文獻報導,選擇合適
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近日,中科院廣州生物醫藥與健康研究院喬治拉夫課題組高精度解析了癌癥相關轉錄因子SOX18的結構,并利用小片段DNA抑制其作用。相關成果日前在線發表于《核酸研究》。癌癥擁有致命特性的原因之一是轉移作用,惡性腫瘤細胞從原發部位經淋巴道等途徑到達其他部位繼續生長,如果抑制了腫瘤細胞的轉移,將有可能限制癌細胞的擴散,進而更好地達到治療癌癥的目的。SOX(SRY-relatedHMG-box)家族蛋白SOX18轉錄因子被證明在胚胎淋巴管生成中起著關鍵開關作用,如果抑制SOX18轉錄因子,可在一定程度上降低