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蛋白免疫印跡技術2015/5/21

免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質印跡（westernblot），它是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。westernblot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上...

核酸凝膠電泳觀察法2015/5/19

實驗原理：瓊脂糖是海藻中提取的線狀高聚物，不同濃度的瓊脂糖密度不同，一般PCR產物使用2%濃度，0.5Kb-10Kb的DNA使用1%濃度，基因組DNA使用0.3%-0.7%濃度；不同大小的核酸在同一濃...

離子交換柱純化蛋白的問題2015/5/13

采用離子交換柱純化蛋白時，洗脫采用的離子強度的大小范圍應該如何確定，可以根據什么來調整洗脫時的離子強度？離子交換純化是利用離子交換劑上的可解離基團（活性基團）對各種離子的親和力不一樣人達到分離的目的的...

超濾實驗基本步驟2015/4/24

1.配料；2.檢查出口閥門是否關閉，攪拌料漿；3.啟動泵，打開出口閥，開始超濾；4.改變壓力，觀察不同壓力對超濾的影響；5.配制不同濃度的懸浮液進行超濾，觀察懸浮液濃度對超濾的影響；6.關閉泵，結束實...

蛋白純化經驗指南2015/4/14

1）我現在手頭有個融合蛋白，純化的時候用助溶劑溶解后做了GST親和層析，之后用蛋白酶切割后卻發現目的蛋白沒有活性。請問有哪些可能會出現這種原因？怎么解決？測過基因序列，沒有問題。細胞破碎后，融合蛋白在...

Adeno-X 表達系統----Z有效的腺病毒系統之一2015/4/1

在人細胞中快速、高水平地表達目的蛋白在2至3個星期內即可獲得價的病毒無需噬斑純化靶細胞可以是分裂或不分裂的細胞（dividing/ornondividingcell）CLONTECH的Adeno-X?...

原核表達操作步驟及注意事項2015/3/27

克隆化基因插入合適載體后導入大腸桿菌用于表達大量蛋白質的方法一般稱為原核表達。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應用。大腸桿菌用于表達重組蛋白有以下特點：易于生長和控制；用于細菌培養的材料不...

重組蛋白純化的基本策略2015/3/25

三階段純化策略純化問題所涉及的具體步驟zui終取決于樣品的性質。但也有共同可參考的階段捕獲階段：目標是澄清、濃縮和穩定目標蛋白。中度純化階段：目標是除去大多數大量雜質，如其它蛋白、核酸、內毒素和病毒等...

Pichia酵母表達系統使用心得2015/3/12

甲醇酵母表達系統有不少優點，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表達系統zui為人熟知，并廣泛應用于外源蛋白的表達。雖然說酵母表達操作簡單表達量高，但是在實際操作中，并不是每個外源基因都能...

現代生物分離技術在多肽蛋白質分離純化中的應用2015/3/10

一、前言隨著基因工程和細胞工程的發展，盡管傳統的分離方法（如溶劑萃取技術）已在抗生素等物質的生產中廣泛應用，并顯示出優良的分離性能，但它難以提取和分離蛋白質。其主要原因有兩個：被分離對象——蛋白質等在...

動物淋巴管內皮細胞的分離2015/1/27

實驗材料：1.哺乳動物胸導管淋巴管2.1×PBS，含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml，pH7.43.0.2%Ⅰ型膠原酶4.眼科剪，眼科鑷5.慕絲線（7號線）、細鐵絲6.離心管（15ml、5...

支原體污染以及檢測2015/1/21

支原體是一種大小介于細菌和病毒之間(zui小直徑0.2um)并獨立生活的微生物，約有1%可通過濾菌器。支原體無細胞壁形態呈高度多形性，可為圓形、絲狀或梨形。支原體形態多變，在光境下不易看清內部結構。電...

培養物的污染及防止2015/1/19

按現代的觀念，凡是混入培養環境中對細胞生存產生有害的成分和造成細胞不純的異物都應該視為污染。根據這一概念，組織培養污染物應包括生物（真菌、細菌、病毒和支原體）、化學物質（影響細胞生存、非細胞所需的化學...

Alarmablue法檢測細胞活力2015/1/12

一、材料1.Resazurin細胞活力檢測試劑盒（Biotium，Inc.30025）2.細胞：在本試驗中，使用了三種人類前列腺癌細胞系進行檢測。（1）DU145（ATCC，HTB-81）（2）PC3...

細胞計數實驗2015/1/8

實驗目的：掌握細胞計數的方法。了解區分細胞存活狀態的方法。實驗用品：0.4%臺盼藍溶液、無水乙醇或95%乙醇溶液、脫脂棉普通顯微鏡、試管、吸管、毛細吸管、細胞計數板、綢布。實驗原理：在細胞培養工作中，...