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定量PCR技術(shù)簡(jiǎn)介2016/4/19

聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction,PCR）是微量核酸擴(kuò)增的有效工具，由于其靈敏、特異、快速等優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)上已廣泛應(yīng)用與病毒、細(xì)菌病原體及遺傳病、腫瘤的早期診斷。隨著PCR技...

士鋒從質(zhì)粒抽提談起2016/4/14

堿裂解法從大腸桿菌制備質(zhì)粒，是從事分子生物學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)室每天都要用的常規(guī)技術(shù)。可以我收研究生十幾年了，幾乎毫無(wú)例外的是我那些給人感覺(jué)什么都知道的學(xué)生卻對(duì)堿法質(zhì)粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是...

DNA抽提指南（TRIZOL）2016/4/6

按照RNA分離操作方案在*移去水樣層后，勻漿中的DNA存在于中間層和苯酚層中也可以被分離出來(lái)。在沉淀和多次洗脫后，DNA溶解在8mMNaOH中。用TRIZOL試劑從組織和培養(yǎng)細(xì)胞中*回收的DNA可以用...

轉(zhuǎn)染常用的報(bào)告基因2016/3/30

報(bào)告基因(reportergene)是一種編碼可被檢測(cè)的蛋白質(zhì)或酶的基因，是一個(gè)其表達(dá)產(chǎn)物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達(dá)調(diào)節(jié)序列相融合形成嵌合基因，或與其它目的基因相融合，在調(diào)控序列控...

PCR擴(kuò)增方面的技術(shù)解答2016/3/28

1、PCR括增的基本原理PCR(PolymeraseChainReaction)是體外復(fù)制DNA的技術(shù)，該技術(shù)幾乎貫穿于現(xiàn)在分子生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。PCR體系由模板，特異性引物，高溫聚合酶，脫氧核糖核酸...

RNA interference2016/3/21

OnewayofseeingwhataGENEdoesistoblockitsmessengerRNAａndnotetheeffects.Newworkshouldmaketheapproachmor...

How to isolate mRNA（分離mRNA）2016/3/16

Background:mRNAs(messengerRNAs)compriseonlyasmallpercentageofallRNAspeciesinaeukaryoticCell,inNeuros...

PROTOCOL FOR NORTHERN BLOTTING2016/3/2

Developedby:ChristopherToddHittingerModifiedfrom:"Bio-RadVacuumBlotterInstructionManual"ａnd"Analysis...

酶切擴(kuò)增多態(tài)性序列2016/2/29

酶切擴(kuò)增多態(tài)性序列（C1eavedAmplifiedPolymorphicSequences，CAPS）是一類以PCR為基礎(chǔ)的共顯性的分子標(biāo)記，它的基本原理是先用已知位點(diǎn)的DNA序列去設(shè)計(jì)一套特異性的...

農(nóng)桿菌質(zhì)粒DNA提取常規(guī)方法2016/2/22

一、從在含20mg/lKanamycin和15mg/lGentamycin5-8ml的液體lb培養(yǎng)基中接種Agrobacterium細(xì)胞，然后在28℃、200-220rpm培養(yǎng)24h。然后進(jìn)行質(zhì)粒提取...

從農(nóng)桿菌提取質(zhì)粒向大腸桿菌DH10B電轉(zhuǎn)化方法2016/1/25

①制做選擇平板LB+25mg/lKan。②核對(duì)好要轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒dna，在15mlFalcontube和cuvette（電轉(zhuǎn)化用的石英樣品槽，兩面磨光，兩面磨砂）標(biāo)好質(zhì)粒名稱。將Falcontube、cu...

各家cDNA文庫(kù)構(gòu)建試劑盒優(yōu)缺點(diǎn)比較2016/1/19

invitrogen的:采用的是Gateway技術(shù)：利用λ噬菌體位點(diǎn)特異重組系統(tǒng)的BP和LR雙向反應(yīng)，首先將PCR產(chǎn)物用傳統(tǒng)方法克隆到Gateway化的入門(mén)載體，這個(gè)目標(biāo)基因就可以迅速方便而且定向地重...

RNA 干擾（RNAi）實(shí)驗(yàn)技術(shù)相關(guān)探討2016/1/12

摘要：RNA干擾(RNAi)是一種由雙鏈RNA所引起的序列特異性基因沉默。它是真核生物中基因轉(zhuǎn)錄后沉默作用的重要機(jī)制之一。RNAi技術(shù)作為新興的基因阻抑方法，在功能基因組學(xué)、微生物學(xué)、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)理...

大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備及外源DNA的轉(zhuǎn)化2016/1/7

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學(xué)研究中的意義。2.學(xué)習(xí)氯化鈣法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的方法。3.學(xué)習(xí)將外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入受體菌細(xì)胞并篩選轉(zhuǎn)化體的方法。實(shí)驗(yàn)原理轉(zhuǎn)化(Transformatio...

DNA分子克隆2015/12/31

在體外將DNA分子片段與載體DNA片段連接，轉(zhuǎn)入細(xì)胞獲得大量拷貝的過(guò)程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步驟包括：制備目的基因→將目的基因與載體用限制性內(nèi)切酶切割和連接，制成DNA重組→導(dǎo)入宿主細(xì)...