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SOC、TB、YPD培養基配制2016/7/18

SOC培養基成分、方法同SOB培養基的配制，只是在培養基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足夠水中，再用...

DNA轉化的要點及疑難解析2016/7/12

1、存放:超級感受態細胞必須從干冰運送包裝箱取出直接放入–80°C冰箱的底部.一定不要用液氮來存感受態細胞.1)存放條件:超級感受態細胞對微小的溫度改變也極度敏感,因此必須存放在–80°C冰箱的底部....

外源DNA和質粒載體的連接反應篩選與操作步驟2016/7/6

DNA克隆技術是70年代分子生物學發展的重大成果，用限制性內切酶直接切割分離某個外源DNA片段，與此同時用同一種限制性內切酶切割載體DNA，兩個DNA產生同樣的粘性末端，將它們混合后，二者的粘性末端通...

農桿菌感受態細胞的制備方法2016/7/4

農桿菌感受態細胞的制備1.挑取少許農桿菌LBA4404，接種于5mlLB液體培養基(含50mg/LSTR)中，28℃、200r/mim培養過夜。2.取2ml培養物于LB液體培養基(含50mg/LSTR...

從低熔點瓊脂糖凝膠中回收DNA片段操作步驟2016/6/28

1、將已經電泳確定的可回收的酶切產物在合適濃度的回收用瓊脂糖凝膠進行電泳。換用新的電泳緩沖液10×TAE(10×Tris-乙酸)。2、當溴酚藍遷移至足夠距離時(至少2cm以上)，在長波紫外燈下觀察，用...

DNA指紋圖譜分析原理與方法2016/6/22

一.實驗目的1.掌握DNA指紋圖譜技術的概念、原理和基本操作過程2.學習DNA的限制性酶切的基本技術3.掌握瓊脂糖凝膠電泳的基本操作技術，學習利用瓊脂糖凝膠電泳測定DNA片段的長度，并能對實驗結果進行...

利用堿裂解法提取與純化質粒DNA2016/6/12

細菌質粒是一類雙鏈、閉環的DNA，大小范圍從1kb至200kb以上不等。各種質粒都是存在于細胞質中、獨立于細胞染色體之外的自主復制的遺傳成份，通常情況下可持續穩定地處于染色體外的游離狀態，但在一定條件...

質粒DNA的小量快速提取2016/5/30

一、目的及要求。1、了解質粒作為載體在基因工程中的作用2、熟記提取質粒的基本原理，學習提取過程和方法3、為下一步實驗提供高純度的DNA樣品二、原理：1、質粒（Plasmid）：獨立于染色體以外的雙鏈、...

DNA 序列分析技術2016/5/25

物種的遺傳多樣性在本質上是DNA一級序列的多樣性。近年來，隨著DNA測序技術的迅速發展和日益普及，DNA測序在遺傳多樣性的研究中正在起著越來越大的作用。本章將介紹目前在遺傳多樣性研究中常用的一種手動和...

PCR－RFLP分析技術2016/5/23

聚合酶鏈式反應（PCR）是模擬體內DNA復制條件在體外酶促合成特異DNA片段的循環反應，可使目的DNA片段得以迅速擴增。其主要步驟是：將待擴增的模板DNA置于高溫(約93℃-95℃)下使之變性解鏈；人...

核酸分離與純化的原理及其方法學進展2016/5/16

核酸的分離與純化技術是生物化學與分子生物學的一項基本技術。隨著分子生物學技術廣泛應用于生物學、醫學及其相關等領域,核酸的分離與純化技術也得到進一步發展。各種新方法、經完善后的傳統經典方法以及商品試劑方...

生物信息學常見術語2016/5/11

BLAST：BasicLocalAlignmentSearchTool，基本的基于局部對準的搜索工具；一種快速查找與給定序列具有連續相同片斷的序列的技術。Entrez：美國國家生物技術信息中心所提供的...

RNA分析的幾個熱點領域及主要技術路線2016/5/9

DNA，RNA和蛋白質是三種重要的生物大分子，是生命現象的分子基礎。基因組DNA中的基因通過轉錄為mRNA并進一步翻譯為蛋白質，很多種類的蛋白質在zui終發揮功能時又經歷磷酸化、糖基化、酶原激活等翻譯...

單核苷酸多態性2016/5/3

SingleNucleotidePolymorphisms(SNPs)representanaturalgeneticvariabilityathighdensityinthehumangenome....

PCR假陰性問題總結2016/4/25

PCR的假陽性問題深受重視，但我個人認為PCR假陰性問題相對于臨床檢測更為嚴重。其實PCR假陽性的問題是比較單純的，一般僅涉及污染和引物的非特異性問題。而污染可以通過嚴格的實驗室管理，合理的環境設置，...