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賽默飛世爾科技在海口舉辦質譜新技術交流會
2009-01-08  來源:智慧城市網

2008年12月10日下午4時許,賽默飛世爾科技在海口麗華酒店舉辦了質譜新技術交流會,主要介紹賽默飛世爾科技質譜技術為制藥相關領域提供的全面解決方案。

    還記得前不久在寧波召開的質譜會上,賽默飛世爾科技著重介紹了其在食品安全相關領域的解決方案;這次選擇在中國質譜學會第八屆全國會員代表大會暨中國質譜學會第九屆全國學術交流會召開前夕舉辦交流會,全面介紹制藥相關領域的解決方案,借助兩場重量級的學術會議,勾畫出賽默飛世爾科技全系列的質譜藍圖,和完整的解決方案。此外,美國質譜大會ASMS上,長于產品創新的賽默飛世爾科技推出了兩款新質譜——TSQ Vantage三重四極桿質譜儀和集成Orbitrap技術的Exactive臺式質譜儀,半年來始終是“猶報琵琶半遮面”,未在公眾場合亮相,這次終于在歲末為大家揭開了面紗,讓渴望已久的質譜愛好者們得以一睹廬山真面。

報告一  
    TSQ Vantage Solutions for Pharmaceutical:Highest Sensitivity, Lowest Noise James Kapron, Strategic Marketing Specialist  
      
    TSQ Vantage在制藥領域的解決方案:高的靈敏度、低的噪音 James Kapron,營銷策略專員

     報告的內容概要如下:  
     2008年,Orbitrap的發明人獲得了ASMS杰出貢獻獎(Distinguished Contribution),很多科研人員正在或將要受益于發明人為大家帶來的創新技術;時光回退7年,在2001年,Finnigan公司的George C. Stafford 也因為在離子阱(Ion Trap)技術上的貢獻,同樣獲得了當年的ASMS杰出貢獻獎,在隨后的若干年直至現在,很多科研人員也在受益于該項技術。隨后,James繼續追溯Finnigan質譜品牌的歷史,包括1967年Finnigan成立、1968年在Stanford大學推出臺四極桿質譜,1980年推出臺商用三重四極桿質譜TSQ等,在TSQ自己的歷史上,它又是如何經歷28年的歷史,發展到了2008年的TSQ Vantage。 
    隨后,在靈敏度方面,對比競爭者,演示為什么“TSQ Vantage是靈敏的三重四極桿質譜”:在圖示的一張比較中,給出了某實際樣品在50 pg/mL(50 ppt)與競爭者的對比圖,并特別強調了:這是測定大鼠血漿中的實際樣品,分辨率采用的是0.7 FWHM,從圖示所見,左側的競爭者圖譜基線噪音較高,而TSQ Vantage的基線非常干凈,因此,其定量下限可以到2.5 pg/mL。

    接著,介紹了HESI-II的新型離子源,特點是在很寬的流速范圍內,都具有高靈敏度,比如在> 1mL/min流速時采用更多的加熱氮氣流來更快去溶劑化;金屬噴針易于更換;使用Contoured tip(輪廓吻合更好的噴霧針尖)可以使低流速(5~25 uL時)具有更高穩定性。

    其次,介紹了在抗干擾設計上的改進。(1)采用即插即拔的固定位置的噴針,確保噴霧的更多離子進入采樣錐并保護離子傳輸管;(2)采樣錐的下部采用非對稱的切面設計,確保脫去的溶劑直接進入排廢液/氣的管路,減少其重新回流到離子源中。在原有Ion Sweep的抗污染設計中加入這些新的設計元素,可以成百上千次地耐受基質非常“臟”的樣品,不損失靈敏度。 
    James演示了一段S-Lens的離子光學設計動畫,它可以進一步提高信噪比,并使離子聚焦更好地傳輸入質譜儀。

    在采用了以上的新設計后,TSQ Vantage可以獲得更好的靈敏度和精密度,比如在5fg時CV值為7.66%。并圖示列舉了大鼠血漿中帕羅西汀(Paroxetine)的定量結果:在5天內分析1000個大鼠血漿樣品(每天200個樣品)的過程中,獲得1~500 pg/mL范圍內的穩定的定量結果。請參見: 
    在使用FAIMS之后,給出了柱上(on column)的1 fg帕羅西汀的測定結果。

    接著,比較了在大鼠血漿中多肽定量(定量下限2 pg/mL)結果;演示了大鼠血漿中右美沙芬Dextromethorphan-d3在0.01 ng/mL的信噪比;咪達唑侖Midazolam-d6在0.01 ng/mL的信噪比等比較結果。 
    在重現性和線性動態范圍方面,介紹了肌紅蛋白Myoglobin酶解的目標肽定量結果:0.01~100 fmol跨越4個數量級。James也介紹了在目標肽定量領域,有幾大挑戰:(1)要求高靈敏度、寬動態范圍;(2)復雜混合物體系,本身蛋白跨越較寬的動態范圍;(3)沒有內標,常常只依靠信號自身的響應定量;(4)低流速的應用體系,這對碰撞池的快速MRM能力,消除交叉污染的能力都提出高的要求。這里,也演示了另一個目標肽GRPQGP*QQGGHQQ在納噴霧(300 nL/min)時,跨越4個數量級(0.02~100 fmol)的定量結果。

    James在此之外,也重申了在所有的TSQ上(且僅在TSQ上),擁有的H-SRM高選擇性反應監測的能力,它可以提高實際測量的信噪比,提高選擇性,增強方法的健壯性(即一旦開發方法,可以應用在不同基質體系條件下)。 
    后,介紹了在藥物開發的GLP過程中,的Watson LIMS軟件的新特點:界面更友好、更容易使用;它既可以和Analyst(AB/Sciex軟件)也可以和LCquan(Thermo軟件)結合使用,并演示了眾多知名大藥廠的典型用戶(基本上所有的大藥廠都是Watson的用戶)。它不僅可以長期支持AB/Sciex用戶,也愿意不斷提高LCquan用戶的使用體驗。 
    總結時,James又再次回顧了TSQ Vantage的特點:高靈敏度、H-SRM、線性范圍、動態范圍、抗干擾性、可以使用Watson、TurboFlow/Multiplexing、FAIMS技術等。在任何基質中,TSQ Vantage具有高的靈敏度,而不提高化學背景噪音;不管對小分子還是大分子都具有寬廣的動態線性范圍;Watson LIMS和TSQ Vantage配合使用,將對符合GLP生物分析認證的用戶提供來源于同一供應商的的整體解決方案。

報告二: 
    Use of Multiplexing in High Throughput Drug Discovery PK Study Alicia Du, Business Development Manager for Pharmaceutical  
    在高通量的藥物研發藥代動力學研究中使用多維液相,Alicia Du博士,業務拓展經理

    報告的內容概要如下: 
    什么是QuickQuan? 
    QuickQuan是在了解了制藥公司(如Pfizer輝瑞、BMS百時美施貴寶、Astra Zenica阿斯利康、Novaris諾華)和其它的研究團隊用戶反饋后設計和研發的,可以高通量地調諧和獲取數據,存儲調諧數據到中央數據庫,使多個團隊/儀器可以獲得這些結果,而避免重復冗余的優化工作。它能自動產生調諧、質譜、處理方法、校正曲線和報告。在復雜實驗的再次運行時使用戶花費少的精力去輸入,在自動化實驗中,臨時文件(template files)可以自動化地生成序列。該軟件可運行在高通量獲取模式(在優化后立即分析)中,也可一步一步地運行(只做優化或只進行分析)。 
    QuickQuan是如何工作的? 
    用戶輸入化合物到QuickQuan的數據庫中,進行化合物優化,使用自動進樣器進樣或者自動流動注射進樣,優化參數包括:母離子M+H(也可對加合物優化,或H-SRM優化);選擇極性和透鏡組優化;產生子離子合適的碰撞能。QuickQuan在數據庫中記錄這些結果,并參考這些參數用于創建儀器方法、及處理方法。 
    用戶定義樣品序列進行分析,可定義樣品化合物或藥物系列的名稱。QuickQuan識別這些化合物或藥物組的名稱,并全自動地創建數據獲取和處理方法。在完成樣品分析后,數據自動被軟件處理,并生成可被查看的數據。  
    QuickQuan的標準配置包括:用流動注射的方式進行化合物優化,和雙柱切換; QuickQuan Aria配置包括:用流動注射的方式進行化合物優化,和多維液相或Turbulent flow技術 TLX2或TLX4。 
    在用流動注射的方式進行化合物優化時,使用PAL作為注射泵,流動注射標準樣品到儀器中,測定極性,優化碰撞能量、光學透鏡和子離子,這是比LOOP環進樣更快的方法,大約每個樣品只需70秒來優化。

      自動進樣器的配置中,左側的注射閥用于流動注射的優化;右邊的三個閥中,頂部閥用于進樣,中間閥用于控制柱切換,底部閥用于控制流速。

    QuickQuan同Aria-Turbo flow以及多維技術的集成應用  
    QuickQuan 2.1和ARIA 1.6軟件還可以協同使用,ARIA是多維系統的操作平臺軟件,協同使用后,用戶無需干預,即可智能化地自動進樣,使用Turbo flow技術在線萃取,多套液相系統配置(1~4通道)用于LX、TX或TLX。自動化地智能進樣(即使一臺LC關掉了,另一臺LC仍能進樣);預設的測探裝置可以估算多維系統和在線萃取的工作。 
    另外,Alicia博士還介紹了QuickClac軟件,它是由Gubbs Inc.公司開發的適用于藥代動力學研究、計算的軟件。

報告三: 
    用LTQ-Orbitrap快速鑒定藥物代謝產物 為博士, 質譜應用部經理

    報告的主要內容如下:  
    為博士首先介紹了在藥物研發的各個環節中,提供更多的信息,提高數據質量,提高確信度,更快速是研發人員的要求。質譜在這方面,可以測定分子量預測化學式;或者用強大的MSn能力,區分那些結構不同的同分異構體,終來唯一地確證化合物的結構。傅立葉變換質譜(FTMS)在這些挑戰性的研究領域越來越受人關注,但是FTMS操作、維護繁瑣令人望而卻步。新型LTQ Orbitrap儀器的出現可同時獲得:液質聯用條件下的質量、高分辨率、高靈敏度、平行分析、操作簡便的性能,Thermo也在致力于將Orbitrap技術進一步擴大到更多的研究領域,因此推出了臺式的Exactive型LC-MS。 
    隨后,王博士列舉了多個實例,表現上述特點。如:高質量精度在預測化學式中的應用;新型的HCD裂解方式;在1秒鐘內,可進行1次LTQ Orbitrap高分辨分析和3次LTQ 低分辨率MS/MS的平行分析;或者全部用高分辨率模式,進行LTQ Orbitrap序列分析,也僅僅需要2秒鐘。 
    在配合Orbitrap使用上,還有應用軟件如Mass Frontier或Metworks,王博士也介紹了一些特點。  
    另外,舉例了RCM(質譜快報)2007,21: 1821~1832上發表的一篇文獻,題為:Metabolite Identification by data-dependent accurate mass spectrometric analysis at resolving power of 60,000 in external calibration mode using an LTQ/Oribtrap 使用LTQ Orbitap,在外標分辨率60,000下進行自動的質量分析和代謝物鑒定。在該文中,作者研究組鑒定了降壓藥carvedilol卡維地洛的58個體外in vitro代謝物,包括芳環羥基化(aromatic hydroxlation)和葡醛酸結合反應(glucuronidation)的代謝物。清晰地展示了為什么高分辨率和質量數是有效的,并提供了一個簡要的代謝物鑒定流程,使用了自動化分析(數據依賴分析),使用了MS和MSn功能和Mass Frontier軟件,鑒定了先前報道過的代謝物,并鑒定了幾個包括谷胱甘肽(glutathione)結合物的新的代謝物。作者給出的總結包括: 
    Orbitrap性能:外標法<2 ppm質量精度;超過35個小時的質量精度穩定性;在高分辨率下譜圖內動態范圍優于3個數量級;所有級數(MS、MS2、MS3)的精測質量< 2 ppm。 
    證明了代謝物鑒定的工作流:(1)用MS、MS2、MS3的質量測定來表征母離子化合物;(2)測定代謝物和子離子;(3)計算元素組成;(4)用MassFrontier確認子離子 
    后,王博士再次總結了LTQ Orbitrap的特點: 
    LTQ Orbitrap是建立在靜態電場離子阱基礎上的新型雜交型(Hybrid)質量分析器,可做MS和MSn 
    它繼承了LTQ的所有特點,包括離子化方式、進樣方式,和出眾的靈敏度,耐用性,易于使用,MSn能力 
    增加了高要求分析的能力:高分辨率、在外標法下的質量測定能力 
    低的儀器維護成本,比如不需要液氦和液氮 
    會后,賽默飛世爾舉行了招待晚宴。

核心關鍵詞:賽默飛世爾

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